本文標題:細菌、植物細胞和哺乳動物細胞-生物學(xué)技術(shù)分析
信息分類:站內(nèi)新聞 新聞來源：未知 發(fā)布時間：2017-10-24 0:59:21
細菌、植物細胞和哺乳動物細胞-生物學(xué)技術(shù)分析
應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)分析復(fù)雜的基因組，首先必須制備純的高
分子量DNA。
從細菌、植物細胞和哺乳動物細胞的基因組DNA的純化方法開
始，這些方法由兩部分組成：先是溫和裂解細胞及溶解DNA的技術(shù)
，接著采用幾種化學(xué)和酶學(xué)方法中的任一種，以去除雜蛋白、RNA
及其他的大分子。這里所述的基本方法廣泛適用于各種起始材料。
本章還簡要地匯編了進一步純化和濃縮核酸的一般方法。
實際上分子生物學(xué)的所有方法從某種程度上講都需要進行核酸
的分級分離。層析技術(shù)對于某些應(yīng)用是合適的，比如分離雙鏈核酸
和單鏈核酸、分離質(zhì)粒與基因組DNA以及從細胞裂解物碎片中分離
基因組DNA。然而，凝膠電泳法因比其他方法具有更高的分離度，
因而成為一般情況下首選的分離方法。凝膠電泳分離法既可以是分
析型的，也可以是制備型的。
總的來說，應(yīng)用凝膠電泳技術(shù)分離核酸比分離蛋白質(zhì)要容易。
核酸是帶均勻負電荷的分子,基本不存在影響遷移率的復(fù)雜結(jié)構(gòu)。
影響核酸在凝膠上的遷移有多種重要的變量，這些變量包括：核酸
的構(gòu)象、凝膠孔徑的大小、所用的電壓梯度以及緩沖液的鹽濃度，
其中最基本的是凝膠孔徑的大小，它決定了能被分離的片段的大小
。在實際操作中，這意味著較大孔徑的瓊脂糖凝膠用于分離>500--
10 000 bp的片段，而較小孔徑的聚丙烯酰胺凝膠或篩分型瓊脂糖
凝膠則用于分離<1 000 bp的片段。
通常需從凝膠電泳分離的復(fù)雜的混合物中鑒別出某個特定的片
段，這可以采用Southern雜交技術(shù)來完成，即先將所有片段從凝膠
上轉(zhuǎn)移至尼龍膜或硝酸纖維素膜上，然后用標記的核酸探針進行雜
交，以鑒別出目的片段。本章全面總結(jié)了固定已分離的DNA片段的
方法與所需材料及相關(guān)的雜交技術(shù)。這些方法為對復(fù)雜基因組中的
單拷貝或多拷貝序列進行定位作圖及鑒別作出了巨大貢獻，并且促
進了最初的真核基因克隆實驗的完成。
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